此試劑盒基于ELISA技術。包被板中包被了抗人IgG抗體，如果人血清或血漿中含有IgG時，則會與其特異性結合，洗板將未結合的物質洗去，然后加入基孔肯雅抗原溶液，洗板洗去未結合的物質，然后加入鏈霉親和素和基孔肯雅抗體酶聯物。洗板后，加入TMB底物液，顏色變成藍色，加入終止液終止反應，顏色由藍色轉為黃色，zui后用酶標儀在450nm處讀數。

【試劑組成】

包被板：12×8可拆卸，包被了抗人IgG抗體，密封在可重封鋁箔袋中

基孔肯雅溶液1：1瓶包含6mL的基孔肯雅抗原溶液，即用，白蓋

基孔肯雅溶液2：1瓶包含6mL的生物素化的基孔肯雅抗體，即用，藍色，白蓋

基孔肯雅IgM陽性質控：1瓶，1.5mL，黃色，即用，紅蓋

基孔肯雅IgM臨界質控：1瓶， 2mL，黃色，即用，綠蓋

基孔肯雅IgM陰性質控：1瓶，1.5mL，黃色，即用，藍蓋

樣本稀釋液： 1瓶包含100mL的即用緩沖液，用于稀釋樣本，pH7.2±0.2，黃色，白蓋

洗滌液：1瓶，包含50mL 20倍濃縮的緩沖液，（pH7.2±0.2）用于洗板，白蓋

鏈霉親和素結合液：1瓶包含6mL過氧化物酶結合的鏈霉親和素，即用，紅色，黑蓋

TMB底物液：1瓶包含15mL TMB，即用，黃蓋

終止液：1瓶包含15mL，即用，內含硫酸，0.2mol/l，紅蓋

【需要的設備和材料】

固定板

封板片

酶標儀（450/620nm）

37℃孵箱

洗瓶或自動洗板機

10~1000μL的移液器

漩渦混勻器

蒸餾水或去離子水

一次性試管

計時器

【儲存和穩定性】

試劑在有效期內，儲存于2-8℃穩定

【試劑準備】

洗滌液的準備

用雙蒸水稀釋洗滌液，例子：10ml洗滌液+190ml雙蒸水。稀釋好的洗滌液在室溫下5天內有效。

【樣本的采集和準備】

這個實驗中使用的樣本是人血清和血漿，如果實驗在樣本采集后的5天內進行，則需要儲存在2-8℃，否則，必須于-20℃到-70℃深度凍存。如果樣本是深度凍存的，在使用前，則需要充分混勻，避免反復凍融。

不推薦使用熱滅活的樣本

【樣本的稀釋】

將10μL樣本跟1ml的樣本稀釋液混勻，并用漩渦混勻器充分混勻。

【實驗步驟】

在開始試驗前，請仔細閱讀試驗說明。結果的可信度是依賴于嚴格地按照實驗說明來進行的，鋪板時zui少留1個孔為空白對照（A1）1個陰性質控孔（B1）2個臨界質控孔（C1+D1）1個陽性質控孔（E1）。開始試驗前，請將所有試劑都平衡到室溫

1. 吸取50μL的質控品和稀釋過的樣本到相應的孔中，留A1孔做空白對照孔

2. 封板

3. 在37±1℃下孵育1小時±5分鐘

4. 當孵育完成時，揭去封板片，棄去反應液，每孔300μL洗滌液，洗板3次，避免溢出。每孔浸泡的時間都必須＞5秒，zui后拍板將殘留的液滴都拍去。

5. 吸取50μL基孔肯雅溶液1到除了空白對照孔的每個孔中，蓋板

6. 在室溫孵育30分鐘

7. 重復步驟4

8. 將基孔肯雅溶液2跟鏈霉親和素結合物混勻10分鐘

9. 吸取50μL基孔肯雅溶液2跟鏈霉親和素的復合物到除了空白對照孔的每個孔中，蓋板。

10. 室溫孵育30分鐘

11. 重復步驟4

12. 吸取100μL TMB底物液到每個孔中

13. 避光孵育15分鐘（精確）

14. 加入100μL終止液到每個孔中，與加TMB底物液時的間隔和順序都必須一樣

15. 用酶標儀在加入終止液后30分鐘內與450/620nm處檢測

【檢測】

調整酶標儀，以空白對照孔調零，以450nm處檢測所有孔的吸光度值。

【結果】

1. 檢測生效的條件

只有以下條件符合，檢測的結果才能認為的有效的

空白對照孔吸光度值＜0.100

陰性質控孔吸光度值＜臨界質控

臨界質控孔吸光度值0.150-1.300

陽性質控孔吸光度值＞臨界質控

如果以上條件不符合的，那么試驗結果則是無效的，需要重新檢測

2. 結果的計算

臨界質控平均吸光度值的計算，例子：吸光度1：0.39；吸光度2：0.37

（0.39+0.37）/2=0.38

平均吸光度值為0.38

3. 結果的說明

樣本如果是比臨界值高出10%，則認定為陽性，

樣本如果是在臨界值上下10%之內，則認定為灰色區（推薦在2-4周之后再次檢測新鮮的樣本，如果樣本仍然是灰色區，可以直接認為是陰性）

樣本如果是比臨界值低出10%，則認定為陰性

4. 結果的單位

病人樣本平均吸光度值×10 = U

臨界值

例子： 1.216×10 =32U

0.38

臨界值： 10 U

灰色區：9-11 U

陰性：＜9 U

陽性：＞11 U

本譯文由廣州健侖生物科技有限和公司編譯僅供參考，詳情請以原文為準。

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