藍耳病病毒抗體檢測試劑盒說明書

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【原理】

        豬繁殖與呼吸障礙綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）又稱藍耳病，是由豬PRRS病毒引起的一種豬傳染病。藍耳病是以母豬妊娠后期發生流產、死產和產木乃伊胎，新生仔豬死亡率高，各年齡豬（尤其是仔豬）出現異常呼吸為特征的傳染性繁殖障礙病。其主要臨床特征是厭食、發熱、繁殖和呼吸障礙。檢測特異性豬藍耳病抗體可作為豬藍耳病疫苗的免疫監測及該病輔助檢測指標。

        本試劑盒采用ELISA方法檢測豬血清中特異性豬藍耳病抗體。本試劑靈敏度高，特異性強，重復性好，操作方便快速，可分多次使用。

【試劑組成】

【操作程序】

1． 洗滌液配制 用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號液）按1：10稀釋，如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。

2． 樣本稀釋   用樣本稀釋液（5號液）將待檢血清樣本按1：40稀釋，如取5ul樣本與195ul樣本稀釋液，混勻。陰性、陽性對照品不用稀釋，直接加樣。

3． 加樣反應   每次試驗設陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔（分別加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100ul）。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100ul。37℃避光反應30分鐘后，甩去孔內液體，每孔注滿工作洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘后再甩凈，拍干。

4． 加酶反應   除空白對照孔外，每孔加酶結合物（1號液） 1滴。37℃避光反應30分鐘后，甩去孔內液體，如上洗滌，拍干。

5． 顯色反應   加底物液（3號液）和顯色劑（4號液）各1滴，混勻，37℃避光顯色10分鐘。加終止液（6號液）1滴，終止反應（加終止液后，藍色會變為黃色）并判讀結果。

【結果判斷】

      陰性對照呈無色或淺黃色，陽性對照呈明顯黃色，表示試驗有效。

      以空白對照調零，用酶標儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度（A值）。待檢孔A值大于陰性對照A值平均值的2.1倍者判為陽性。如陰性對照A值的平均值低于0.08時按0.08計算。

【注意事項】

      1.試劑盒于2-8℃保存，有效期12個月。每次使用前應先平衡至室溫。

      2.未使用完的板條應密封保存。

      3.試劑盒中終止液具有腐蝕性，要小心使用。

      4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。

      5.試驗樣本應為無染菌、無血脂、無溶血的血清。任何樣本都應視為傳染源妥善處理。

      6. 37℃孵育時，建議使用水浴箱。如無條件，可在溫箱中放置濕盒進行反應并同時用不干膠膜封蓋板孔。

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