Qiagen去內毒素質粒大提試劑盒
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英文名：EndoFree Plasmid Maxi Kit 中文名：Qiagen去內毒素質粒大提試劑盒品 牌：QIAGEN
- 產品描述
Qiagen去內毒素質粒大提試劑盒
Qiagen去內毒素質粒大提試劑盒純化得到至多10 mg的無內毒素高轉染級純質粒或柯斯質粒DNA
- 純化得到的DNA內毒素水平低于0.1 EU/Μg
- 純化流程快，同時去除內毒素
- 獲得高產量、高拷貝質粒DNA
- 使用LyseBlue，獲得裂解和高產量的DNA
EndoFree Plasmid Kits基于陰離子交換技術，可快速制備不含內毒素的質粒DNA。QIAfilter Cartridges過濾快速澄清裂解液。制備的DNA純度超過兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度，適合超轉染級純的應用。EndoFree Plasmid Buffer Set可用于制備10次mega規模或5次giga規模轉染級純質粒或科斯質粒DNA制備
性能
EndoFree Plasmid Kit將高效的內毒素去除步驟整合到質粒純化流程中，不需要額外步驟，也不需用親和柱去除脂多糖。通過QIAfilter Mega-Giga Cartridge過濾細菌裂解液，并使用重力流QIAGEN-tip陰離子交換柱純化質粒DNA。產量可達10 mg（Giga）、2.5 mg（Mega）、500 μg（Maxi）DNA。純化的DNA無內毒素（<0.1 EU/µg DNA）。
選用EndoFree Plasmid Mega Kit而非EndoFree Plasmid Giga Kit純化低拷貝質粒和科斯質粒，將會得到更好的效果，因為后者需要較大的培養體積，而QIAfilter Mega-Giga Cartridge的容量有限。
EndoFree Plasmid Kits去除細菌在裂解過程中釋放的內毒素，內毒素會影響原代細胞和敏感培養細胞的DNA轉染。從EndoFree Plasmid Kits得到的無內毒素DNA高度適用于可重復且結果可靠的轉染（參見Plasmid purification method versus transfection efficiency和Plasmid purity versus transfection efficiency及表"Endotoxin levels in plasmid preparations"和"EndoFree DNA yields high transfection efficiencies with primary cells"）。QIAGEN超純無內毒素DNA也適用于基因治療研究和其他敏感應用。
| 質粒制備方法 | 內毒素（EU†/µg DNA） | 平均轉染效率‡ |
|---|---|---|
| EndoFree Plasmid Kit | 0.1 | 154% |
| QIAGEN Plasmid Kit | 9.3 | 100% |
| 2x CsCl | 2.6 | 99% |
| Silica-gel slurry | 1230.0 | 24% |
| DNA純化方法 | 轉染細胞比例 |
|---|---|
| EndoFree Plasmid Kit | 21.0% ± 0.93 |
| QIAGEN Plasmid Kit | 8.1% ± 0.57 |
| Silica-gel slurry | 5.2% ± 0.74 |
原理
純化的質粒DNA內毒素污染水平取決于所用的純化方法（參見"Endotoxin levels in plasmid preparations"）。硅膠技術純化的DNA具有非常高的內毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對低水平內毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內毒素去除步驟，獲得<0.1 EU/µg的質粒DNA。
QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊設計的過濾裝置，用于代替細菌細胞堿裂解后的離心步驟。QIAfilter Cartridges可*去除SDS沉淀，清除細菌裂解液，相比離心可大量節約時間，減少1小時的質粒純化時間。QIAfilter Mega-Giga Cartridges采用內部真空方式輕松高效的清除大量細菌裂解液（注意：該試劑盒不包含瓶子）。
QIAGEN-tips中*的陰離子交換樹脂（不提供EndoFree Plasmid Buffer Set）專為核酸純化而開發。它的分離性能使得DNA純度與連續兩次CsCl梯度離心獲得的DNA純度相當。由重力流驅動并持續運轉的預裝QIAGEN-tips，最大限度減少手動制備質粒所需的時間。整個QIAGEN質粒純化系統不使用有毒物質，如苯酚，溴化乙錠和CsCl，最大限度地減少對用戶和環境的危害。
內毒素，又稱脂多糖或LPS，是大腸桿菌等革蘭氏陰性菌細胞膜的組成部分，如大腸桿菌（參見Bacterial cell wall）。內毒素在質粒裂解純化過程中釋放出來，并顯著降低內毒素敏感細胞株的轉染效率。此外，內毒素與DNA競爭“自由”轉染試劑，影響轉染實驗中質粒DNA的攝取。內毒素也誘導巨噬細胞和B細胞等免疫細胞發生非特異性免疫反應，從而導致轉染結果的誤讀。這些反應包括誘導的蛋白質和脂類，如IL-1和前列腺素等的合成。總體而言，內毒素在轉染實驗中是不可控變量，影響結果的可重復性，使它們難以對比、解讀。在基因治療研究中，內毒素可造成內毒素休克綜合癥和激活補體級聯，干擾研究。
操作流程
在堿性條件下，細菌細胞裂解，使用QIAfilter Mega-Giga Cartridge清除粗裂解物。將Endotoxin Removal Buffer加入到過濾后的裂解液中。冰浴后，將純凈的裂解物上樣到陰離子交換柱上，在適當的低鹽和pH條件下，質粒DNA選擇性結合。用中鹽緩沖液清除RNA、蛋白質、代謝產物和其他低分子量雜質，超純質粒DNA被高鹽緩沖液洗脫（參見QIAGEN Plasmid Kit procedures）。最后DNA由異丙醇脫鹽、沉淀并且離心回收。
應用
使用EndoFree Plasmid Kits純化的DNA適合多種敏感應用，包括：
- 轉染，包括原代、敏感以及懸浮細胞
- 基因治療研究
- 基因沉默
- 顯微注射
我司還提供其它進口或國產試劑盒：登革熱、瘧疾、流感、A鏈球菌、合胞病毒、腮病毒、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團菌、化妝品檢測、食品安全檢測等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清、各種產品原料等產品。
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